蛋白質(zhì)沉淀破壞蛋白質(zhì)分子的水化作用或者減弱分子間同性相斥作用的因子，使蛋白質(zhì)在水中的溶解度降低而沉降下來轉(zhuǎn)化為固體的分離方法。那么常用的蛋白沉淀劑有哪些呢？接下來佰佰安全網(wǎng)來詳細(xì)為大家介紹一下吧。

通常除蛋白的方法是在含蛋白樣品中加人適量的沉淀劑或變性劑, 它們的作用是蛋白質(zhì)脫六而沉淀如有機(jī)溶劑、中性鹽有的是由于蛋白質(zhì)形成不溶性鹽而析出如一些酸類三氯醋酸、高氯酸、磷酸、苦味酸, 以及重金屬離子汞離子、銅離子, 離心后取上清液用于分析。

甲醇、乙睛、丙酮和乙醇是沉淀蛋白常用的有機(jī)溶劑，中性鹽有硫酸銨、氯化銨等。無機(jī)鹽沉淀蛋白是可逆的即將樣品稀釋后蛋白仍具有生理活性而有機(jī)溶劑與酸類沉淀的蛋白是不可逆的, 用甲醇沉淀蛋白的優(yōu)點(diǎn)是上清液清涼, 沉淀為絮狀易于分離，乙睛與之相反, 產(chǎn)生細(xì)的蛋白沉淀。

在做血漿樣品時，用甲醇或乙腈沉淀蛋白，一般用血漿與沉淀劑的比例為乙腈最低1:2（一般1:3以上），甲醇最低1:3（一般1:5以上），有實(shí)驗(yàn)顯示以血清：水：乙腈為1：2：4.5時去除效果最好。

蛋白質(zhì)沉淀法有：

1．熱變性及酸堿變性沉淀法 用于選擇性的除去某些不耐熱及在一定PH值下易變性的雜蛋白。

2．有機(jī)溶劑沉淀法 多用于生物小分子、多糖及核酸產(chǎn)品的分離純化，有時也用于蛋白質(zhì)沉淀。

3．等電點(diǎn)沉淀法 用于氨基酸、蛋白質(zhì)及其它兩性物質(zhì)的沉淀。但此法單獨(dú)應(yīng)用較少，多與其它方法結(jié)合使用。

4．非離子多聚體沉淀法 用于分離生物大分子。

5．生成鹽復(fù)合物沉淀 用于多種化合物，特別是小分子物質(zhì)的沉淀。

6．鹽析法

一、鹽析法

一般來說，所有固體溶質(zhì)都可以在溶液中加入中性鹽而沉淀析出，這一過程叫鹽析。在生化制備中,許多物質(zhì)都可以用鹽析法進(jìn)行沉淀分離，如蛋白質(zhì)、多肽、多糖、核酸等，其中以蛋白質(zhì)沉淀最為常見，特別是在粗提階段多用于各種蛋白質(zhì)和酶的分離純化。

二、有機(jī)溶劑沉淀法

有機(jī)溶劑的沉淀機(jī)理是降低水的介電常數(shù)，導(dǎo)致具有表面水層的生物大分子脫水，相互聚集，最后析出。該法優(yōu)點(diǎn)在于：1）分辨能力比鹽析法高，即蛋白質(zhì)或其它溶劑只在一個比較窄的有機(jī)溶劑濃度下沉淀；2）沉淀不用脫鹽，過濾較為容易；3）在生化制備中應(yīng)用比鹽析法廣泛。其缺點(diǎn)是對具有生物活性的大分子容易引起變性失活，操作要求在低溫下進(jìn)行?？傮w來說，蛋白質(zhì)和酶的有機(jī)溶劑沉淀法不如鹽析法普遍。

有機(jī)溶劑的選擇首先是能和水混溶，使用較多的有機(jī)溶劑是乙醇、甲醇、丙酮，還有二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、乙腈和2-甲基-2,4戊二醇等。

有多種因素影響有機(jī)溶劑的沉淀效果：1）溫度 低溫可保持生物大分子活性，同時降低其溶解度，提高提取效率；2）樣品濃度和PH 與鹽析法中的作用基本相同；3）金屬離子一些多價陽離子如鋅離子和鈣離子在一定PH下能與呈陰離子狀態(tài)的蛋白質(zhì)形成復(fù)合物，這種復(fù)合物在水中或有機(jī)溶劑中的溶解度都大大下降，而且不影響蛋白質(zhì)的生物活性。4）離子強(qiáng)度 鹽濃度太大或太低都對分離有不利影響，對蛋白質(zhì)和多糖而言鹽濃度不超過5%比較合適，使用的乙醇量不超過二倍體積為宜。

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責(zé)任編輯:陳淼琪