隨著其保健功能得到醫(yī)學(xué)研究的證明,茶氨酸的市場需求也越來越廣,而且對產(chǎn)品的純度和安全性要求也越來越嚴(yán)格,那么茶氨酸的合成方法有哪些呢?一起隨小編來看看吧。
因為茶葉中茶氨酸的含量只有1%~2%,直接從茶葉中提取制備茶氨酸將帶來很大成本,因此,國內(nèi)外很多學(xué)者對合成手段來制備茶氨酸的途徑進行了大量研究,并取得了較好進展,那么茶氨酸的合成方法有哪些呢?下面就一起隨佰佰安全網(wǎng)小編來了解一下吧。
方法一:化學(xué)合成法
茶氨酸的合成前體為L-谷氨酸和乙胺之后,采用化學(xué)合成方法來制備茶氨酸的研究一直持續(xù)不斷進行著。茶氨酸化學(xué)合成的一般原理,就是用L-谷氨酸供體(主要是酯型L-谷氨酸供體或是乙?;腖-谷氨酸供體),與乙胺或乙胺供體混合,通過控制反應(yīng)條件來實現(xiàn)L-谷氨酸與乙胺基結(jié)合形成茶氨酸。
最早的方法是以焦谷氨酸途徑合成茶氨酸。1942年,以色列人Lichtenstein首次利用乙胺和吡咯烷酮酸(焦谷氨酸)在金屬催化劑的作用下反應(yīng)得到了茶氨酸,同時也開創(chuàng)了化學(xué)方法合成茶氨酸的研究 。Yamada對工藝進行了改進,先使L-吡咯烷酮酸形成銅鹽,再與純乙胺反應(yīng)液反應(yīng)合成茶氨酸,這樣達(dá)到提高茶氨酸合成反應(yīng)的收率,但是反應(yīng)周期比較長,需要7~10天才能完成一個合成周期 。李炎等將L-吡咯烷酮酸與無水乙胺直接在惰性氣體環(huán)境下,在壓力為6.0~12.0 MPa,溫度為60~100℃下反應(yīng)合成茶氨酸 。鄭國斌在在李炎的方法基礎(chǔ)上進行了改進,茶氨酸的收率達(dá)到20%以上 。
通過N-取代的谷氨酸-γ-酯途徑合成茶氨酸,即先將谷氨酸-γ-羧基酯化,選擇不同的保護基來保護α-氨基,用乙胺氨基置換乙氧基,之后加乙酸去除保護基就可以得到茶氨酸。1964年Furuyama等 用CS2,1993年Hirokazu等 用氯化三苯甲烷,2000年Setsuko等 用芐氧甲酰基來保護谷氨酸的α-氨基分別合成茶氨酸。
還有通過N-取代谷氨酸酸酐法途徑合成茶氨酸的方法。該方法先用保護基將谷氨酸的α-氨基保護起來,之后使其分子內(nèi)脫水形成谷氨酸酐后,直接與乙胺作用生成N-取代茶氨酸,然后再去除保護基得到茶氨酸。焦慶才以L-谷氨酸為原料,采用鄰苯二?;鳛楸Wo基,醋酐回流10min,使其分子內(nèi)脫水生成鄰苯二甲酰-L-谷氨酸酐,再在常溫、常壓下,于2mol/L乙胺水溶液中反應(yīng),得到中間產(chǎn)物鄰苯二甲酰-L-谷氨酸,再在室溫下與0.5mol/L水合肼反應(yīng)作用48h脫除保護基,可得到L-茶氨酸,收率為61% 。
方法二:微生物發(fā)酵法
微生物發(fā)酵法,即利用微生物中的谷氨酰胺合成酶,模擬茶樹體內(nèi)環(huán)境,在ATP提供能量的條件下,將谷氨酸和乙胺催化合成茶氨酸。該方法的優(yōu)點在于,不需要對α-氨基進行乙胺基化,而且作用的副產(chǎn)物少,便于分離純化。具體操作是,將含有谷氨酰胺合成酶的微生物菌株,在含有0.9%NaCl的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng),得到大量菌之后,通過提純谷氨酰胺合成酶或直接將細(xì)菌固定化后,作用于乙胺和谷氨酸的混合物中,催化形成茶氨酸。Abelian 和Takashi先后用固定化硝基還原假單孢細(xì)菌(IFO12694)細(xì)胞或從中提取谷氨酰胺合成酶催化合成茶氨酸 。Hideguki等從大腸桿菌(K-12)中提取γ-谷氨酰胺轉(zhuǎn)肽酶來催化谷氨酸和乙胺形成茶氨酸,其轉(zhuǎn)化率達(dá)到60% 。
利用微生物發(fā)酵法合成制備茶氨酸,涉及到谷氨酰胺酶活性的保持及其反應(yīng)條件的控制,包括反應(yīng)溫度、pH、底物濃度等。這些條件都與轉(zhuǎn)化率、產(chǎn)率及其生產(chǎn)效率密切相關(guān),且技術(shù)條件要求高,操作復(fù)雜,工業(yè)生產(chǎn)難度較大。
方法三:植物細(xì)胞培養(yǎng)法
植物細(xì)胞培養(yǎng)法,是通過對茶樹細(xì)胞的離體培養(yǎng)基培養(yǎng),或茶樹愈傷組織細(xì)胞培養(yǎng),對培養(yǎng)條件進行調(diào)控,如調(diào)節(jié)pH、溫度、培養(yǎng)液的成分,或是加入L-谷氨酸鹽、乙胺和激素,促進茶氨酸合成酶活性的金屬離子等,利用細(xì)胞中的茶氨酸合成酶來合成茶氨酸,從而達(dá)到富集茶氨酸的效果。
以上就是茶氨酸的合成方法有哪些的內(nèi)容介紹,如需了解更多茶氨酸等小知識,請繼續(xù)關(guān)注佰佰安全網(wǎng)食品安全常識欄目吧。
責(zé)任編輯:王小麗
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