隨著轉(zhuǎn)基因大豆、馬鈴薯、油菜等許多轉(zhuǎn)基因作物走進(jìn)人們的生活，轉(zhuǎn)基因玉米也進(jìn)入人們的視野。與其相關(guān)的問題也比比皆是，如轉(zhuǎn)基因玉米能化驗(yàn)出嗎?轉(zhuǎn)基因玉米能吃嗎?轉(zhuǎn)基因玉米怎么判斷?等等。今天佰佰安全網(wǎng)小編就來和大家說說轉(zhuǎn)基因玉米化驗(yàn)的相關(guān)知識(shí)，讓我們一起來看看吧!

首先，小編在這里告訴大家轉(zhuǎn)基因玉米是能化驗(yàn)出的，具體檢測步驟如下：

1.模板DNA提取

稱取2g粉樣于10mL離心管中，加入5mL CTAB裂解液（含適量RNA酶），混勻60℃水浴振蕩保溫1h；2000r/min離心5min；取上清液，加等體積三氯甲烷一異戊醇（24：1）混勻，靜置5min，8000r/min離心5min；小心取離心上清液，再加等體積三氯甲烷一異戊醇 （24：1）混勻，靜置5min，8000r/min離心5min；取離心上清液加0.65倍體積的異丙醇。 混勻，12000r/min 4℃離心5min；棄上清液，加500μL 70%冰乙醇洗滌一次，12000r/min4℃離心5min；棄上清液，將沉淀晾干，加入50μL TE，溶解沉淀（4℃過夜，或37℃保溫1h）；此即為總DNA提取液。也可用相應(yīng)的市售DNA提取試劑盒提取DNA。

2.PCR定性檢測

（1）PCR反應(yīng)體系。檢測轉(zhuǎn)基因玉米中內(nèi)源基因和外源基因的PCR反應(yīng)體系。

每個(gè)反應(yīng)體系應(yīng)設(shè)置兩個(gè)平行反應(yīng)。以轉(zhuǎn)基因玉米或已知相應(yīng)陽性質(zhì)粒作為陽性對照，非轉(zhuǎn)基因玉米作為陰性對照，以水代替模板DNA作為空白對照。

（2）PCR反應(yīng)循環(huán)參數(shù)。94℃預(yù)變性2min，94℃變性40s，55～58℃退火60s，72℃延伸60s，35個(gè)循環(huán)。72℃延伸5min。4℃保存。也可根據(jù)不同的基因擴(kuò)增儀對PCR反應(yīng)循環(huán)參數(shù)做適當(dāng)調(diào)整。

（3）PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測。用電泳緩沖液（1×TBE或TAE）制備2%瓊脂糖凝膠（其中在55～60℃加入EB或其他染色劑至終濃度為0.5μg/μL，也可在電泳后進(jìn)行染色）。將10～15μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物分別和2μL上樣緩沖液混合，進(jìn)行點(diǎn)樣。用100bp梯帶DNA標(biāo)記物（Ladder DNA Marker）或相應(yīng)合適的DNA標(biāo)記物（DNA Marker）作分子量標(biāo)記。3～5V/cm恒壓，電泳20～40min。凝膠成像儀觀察并分析記錄。

（4）結(jié)果判斷

①內(nèi)源基因的檢測用針對玉米內(nèi)源的IVR基因（或Zein基因）設(shè)計(jì)的引物對玉米DNA提取液進(jìn)行PCR測試，陰性對照、陽性對照和待測樣品均應(yīng)被擴(kuò)增出226bp（或173bp）的PCR產(chǎn)物。如未見有該P(yáng)CR產(chǎn)物擴(kuò)增，則說明DNA提取質(zhì)量有問題，或DNA提取液中有抑制PCR反應(yīng)的因子存在，應(yīng)重新提取DNA，直到擴(kuò)增出該P(yáng)CR產(chǎn)物。

②外源基因的檢測對玉米樣品DNA提取液進(jìn)行外源基因的PCR測試，如果陰性對照和空白對照未出現(xiàn)擴(kuò)增條帶，陽性對照和待測樣品均出現(xiàn)預(yù)期大小的擴(kuò)增條帶擴(kuò)增片段長度，則可初步判定待測樣品中含有可疑的該外源基因，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行確證試驗(yàn)，依據(jù)確證試驗(yàn)的結(jié)果做最終報(bào)告；如果待測樣品中未出現(xiàn)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，則可斷定待測樣品中不含有該外源基因。

③篩選檢測和鑒定檢測的選擇對玉米樣品中轉(zhuǎn)基因成分的檢測，可先篩選檢測CaMV35S、NOS、NPT、PAT、BAR基因，篩選檢測結(jié)果陰性則直接報(bào)告結(jié)果。

若篩選檢測結(jié)果陽性，則需進(jìn)一步鑒定檢測IVS2/PAT、Maize genome/CaMV35S、HSP70/CryIAb、CDPK/CrylAb、CaMV 35S/PAT、PAT/CaMV 5S、CaMV 35S/Cry9C、Cry9C/CaMV35S、PactinI/mEPSPS、OTP/mEPSPS基因，以確定是何種轉(zhuǎn)基因玉米品系。

（5）確證試驗(yàn)樣品檢測為陽性結(jié)果時(shí)需要用實(shí)時(shí)熒光PCR來確證。

以上是關(guān)于轉(zhuǎn)基因玉米能化驗(yàn)及相關(guān)知識(shí)的介紹，希望能給大家?guī)韼椭Ｈ绻肓私飧嗟?a href="http://www.htin8.cn/cs/spaq/zjysp/" target="_blank">轉(zhuǎn)基因食品安全知識(shí)與食品安全小知識(shí)，請您時(shí)刻關(guān)注佰佰安全網(wǎng)。

責(zé)任編輯:何顯搶